Exame de QUALIFICAÇÃO- NOEMIA NIELLY AMARAL NOGUEIRA

DISCENTE: NOEMIA NIELLY AMARAL NOGUEIRA
DATA: 26/04/2024

HORA: 14:00 horas

LOCAL: Plataforma virtual

TÍTULO: AVALIAÇÃO DOS EFEITOS IMUNOMODULADORES DA BD-8, BD-15 E DIGOXINA EM MODELOS DE INFECÇÃO COM MICOBACTÉRIAS

RESUMO:
Os esteroides cardiotônicos são compostos orgânicos que têm a propriedade de inibir a
Na+/K+-ATPase. Foi descrito na literatura que a ouabaína e a digoxina são moléculas
endógenas capazes de interferir em diversos aspectos da resposta imunológica.
Recentemente novos esteróides cardiotônicos foram sintetizados a partir da digoxina:
BD-8 (8-benzilideno digoxina) e BD-15 (15-benzilideno digoxina). No entanto, pouco
se sabe sobre o efeito destes compostos em processos inflamatórios e infecciosos. Nesse
contexto, o objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos das moléculas BD-8, BD-15 e
digoxina em modelos de infecção por Mycobacterium smegmatis utilizando linhagem
de macrófagos murinos RAW 264.7. Inicialmente, foram realizados ensaios in vitro por
concentração inibitória mínima (MIC). Para o estudo da viabilidade celular, foi utilizado
o método de colorimétrico de MTT, com diferentes concentrações (10 μM, 5 μM, 1
μM, 0.1 μM e 0.01μM), nos tempos de 24, 48 e 72 horas. Para a avaliação do efeito
terapêutico, realizou-se a contagem de unidades formadoras de colônias (CFU) em
ensaios de placa, onde as células RAW foram infectadas com Mycobacterium
smegmatis e tratadas com os esteroides. Para a dosagem de citocinas, foi utilizado o
método de ELISA. Avaliada a MIC, observou-se que as moléculas não inibiram o
crescimento bacteriano em concentrações acima de 200 μg/mL. Nos resultados de
viabilidade, a BD-8 não apresentou atividade citotóxica em 24 horas, porém apresentou
citotoxicidade em 10μM e 5μM em 48hrs, e 10μM, 5μM e 1μM em 72 horas. A BD-15
não apresentou atividade citotóxica em nenhuma concentração e tempos testados e foi o
esteroide sintético escolhido para a continuidade dos experimentos. A digoxina não
apresentou atividade citotóxica no tempo de 24 horas, entretanto apresentou
citotoxicidade 10μM e 5μM em 48hrs, e 10μM e 1μM em 72 horas. Com relação à
contagem de CFU, a BD-15 e a digoxina reduziram o número de CFU’s por poço em
10μM em 24hrs comparado com o controle. A produção de IL-6 aumentou 50% com o
tratamento da BD-15 e 19% com o tratamento da digoxina, comparado com controle
infectado. A IL-1β, aumentou 13% com o tratamento da BD-15 e 1% com o tratamento
da digoxina, comparado ao controle infectado. Na produção de TNF-α, houve aumento
de 104% com o tratamento da BD-15 e aumento de 84% com o tratamento da digoxina,
todas em comparação com o controle infectado. Dessa forma, este trabalho contribui
para uma melhor compreensão do papel dos esteroides cardiotônicos em modelo de
infecção com micobactérias.
Palavras-chave: Esteroide cardiotônico. Tuberculose. Mycobacterium smegmatis