Banca de DEFESA: EUGENIA ABRANTES DE FIGUEIREDO

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: EUGENIA ABRANTES DE FIGUEIREDO
DATA: 28/02/2013
HORA: 14:00
LOCAL: PPgPNSB
TÍTULO: Desenvolvimento de Método Cromatográfico para Quantificação dos Níveis de Poliaminas e Investigação da Formação Dde Adutos com Naftoquinonas
PALAVRAS-CHAVES: poliaminas. cloreto de dansila. CLAE. naftoquinonas.
PÁGINAS: 70
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Farmácia
RESUMO:

Poliaminas são bases orgânicas alifáticas pertencentes às aminas bioativas que desempenham importantes funções metabólicas e fisiológicas em animais, vegetais e microrganismos. As mais importantes biologicamente são a espermidina [N-(3-aminopropil)-1,4-butano diamina ou aminopropil-tetrametilenodiamina] (SPD) e a espermina [N,N’-bis(3-aminopropil)-1,4-butano diamina ou diaminopropil-tetrametilenodiamina] (SPM). Estão intimamente envolvidas no crescimento e replicação de diversos tipos de células, e em especial encontra-se em altas concentrações em células exibindo crescimento rápido. É possível que substâncias tais como as naftoquinonas, que possam reagir com as poliaminas, tenham a capacidade de bloquear as suas funções pela depleção de sua concentração. A sua detecção direta é dificultada por não possuírem grupos que apresentam alta absortividade molar. Desse modo, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um método cromatográfico, utilizando detecção por fluorescência que possa ser aplicado a quantificação do nível celular de poliaminas em cultura de células tumorais com base nos seguintes parâmetros: seletividade, linearidade, precisão e exatidão e einvestigar a formação de adutos com naftoquinonas. Para tanto derivatizou-se as poliaminas fora do sistema cromatográfico (pré-coluna) com cloreto de dansila, formando derivados dansilados que foram detectados por fluorescência (l_ex= 365 nm; l_em= 510 nm). A separação se deu por eluição em modo gradiente, utilizando como fase móvel metanol:água (35-95 v/v), uma coluna de fase reversa C-18 (250 x 4,6 mm, 5μm) a um fluxo de 1,0 mL/min, em 35 minutos.  O método cromatográfico desenvolvido foi validado segundo o preconizado na Resolução 899 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), e mostrou-se sensível, linear na faixa de concentração utilizada para SPD (97-970 pmol/mL)  e para SPM (74-740 pmoL/mL), preciso (≤ 15% para as concentrações média e alta; ≤ 20% para a concentração baixa), exato para SPD (91-112%) e para SPM (92-119%), mostrando-se também seletivo (frente a separação das poliaminas e as proteínas presentes no meio de cultivo celular). O método desenvolvido foi ainda aplicado à análise das poliaminas incubadas com as naftoquinonas (lapachol e β-lapachona), e observou-se que a concentração dessas aminas foi depletada quando incubadas por 17 horas a temperatura ambiente com as naftoquinonas (diminuição de 67% e 50% dos níveis de SPD e SPM respectivamente quando incubadas com o lapachol; e diminuição de 44% e 37,5% de SPD e SPM quando incubadas com β-lapachona). Esses resultados mostram que o método desenvolvido é adequado para análise de poliaminas em cultura de células tumorais e que um provável mecanismo de ação antitumoral das naftoquinonas pode envolver a formação de adutos entre estas e as poliaminas.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - ANA PAULA BARRETO GOMES - UFRN
Interno - 1349965 - BARBARA VIVIANA DE OLIVEIRA SANTOS
Presidente - 2113418 - EDUARDO DE JESUS OLIVEIRA