Banca de DEFESA: ERICKA GARCIA LEITE

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ERICKA GARCIA LEITE
DATA: 30/08/2019
HORA: 14:00
LOCAL: Auditório
TÍTULO: AVALIAÇÃO DOS EFEITOS INDUZIDO PELO 2-NITRATO-1,3-DIBUTOXIPROPANO (NDBP) NA FUNÇÃO VASCULAR EM MODELO DE ATEROSCLEROSE
PALAVRAS-CHAVES: Disfunção endotelial, aterosclerose, óxido nítrico, doadores de NO.
PÁGINAS: 88
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Fisiologia
RESUMO: A aterosclerose e uma doenca arterial cronica, de carater inflamatorio e fibroproliferativa que acomete milhares de pessoas ao ano sendo uma das principais causas de morte a nivel mundial. A disfuncao endotelial e uma das principais alteracoes detectaveis durante o desenvolvimento da aterosclerose. Caracterizada por vasodilatacao prejudicada e aumento da resposta vasoconstritora, principalmente pela diminuicao da biodisponibilidade de NO e perda da sinalizacao da via NO/GMPc/PKG. Experimentalmente, pode ser demonstrada por prejuizo do relaxamento dependente de endotelio a acetilcolina (Ach) e aumento da resposta de contracao a fenilefrina (Phe). Os nitratos organicos vem sendo utilizados ha anos para tratamento de doencas cardiovasculares mimetizando o papel do NO endogeno. Porem, a utilizacao desses compostos a longo prazo resulta no desenvolvimento de tolerancia. Neste estudo foi avaliado um nitrato organico sintetizado a partir da glicerina, o 2-nitrato-1,3-dibutoxipropano (NDBP). Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do NDBP na funcao vascular em modelo de aterosclerose. Utilizou-se camundongos machos, das linhagens C57BL/6 (CT) e nocautes para a apolipoproteina E (apoE-/-), os quais respectivamente receberam dieta padrao e dieta aterogenica Western Type (Rhoster, Sao Paulo, Brasil), contendo 41% de calorias em forma de lipidios e 1,5% de colesterol a partir de 8 semanas de vida, durante as 12 semana subsequentes. Os animais foram separados em 3 grupos: animais C57 controle com dieta padrao, animais apoE-/- com dieta aterogenica e animais apoE-/- com dieta aterogenica tratados com NDBP cronicamente ou in vitro. O sangue dos animais foi coletado para dosagem de colesterol total. As aortas dos animais foram coletadas e processadas para estudos em banho de orgaos ou avaliacao histologica da deposicao de placa (coloracao Oil-Red), producao de EROs (DHE) e NO (DAF-2DA). A funcao vascular foi avaliada por meio da construcao de curvas concentracao-resposta a ACh (100 pM – 30 µM), apos pre-contracao com fenilefrina (FEN, 10 µM) e curvas concentracao-resposta a FEN (100 pM – 30 µM). Para avaliar a producao basal de NO por metodo indireto, apos uma pre-contracao com FEN (10µM) os aneis foram incubados com o inibidor nao especifico da isoformas da oxido nitrico sintase L-NAME (100 µM). Com intuito de avaliar a influencia do NDBP sobre a funcao vascular, os aneis foram incubados com NDBP (10 µM) em seguida foram realizados os testes de funcao vascular. A avaliacao da atividade vasorrelaxante do NDBP foi realizada por meio de curvas concentracao-resposta ao NDBP (100 pM – 30 µM) apos pre-contracao com FEN (10 µM) em aneis com e sem endotelio. Para avaliar se o efeito do NPBP sobre a funcao vascular e dependente de NO ou de atividade antioxidante, os aneis foram incubados com NDBP (10µM) mais hidroxicobalamina (HDX, 100µM) ou tempol (1µM). No grupo apoE-/- que foi tratado cronicamente por 14 dias, apos o tratamento foi realizado teste de funcao vascular e avaliacao da producao basal de NO. Os animais apoE-/- apresentaram incremento de aproximadamente 12 vezes nos niveis de colesterol (CT 58.2±3.6 vs. apoE-/- 704.9±29.9) e marcante deposicao de placa (CT 0±0 vs. apoE-/- 57±4.9). Os animais apoE-/- demonstraram marcante disfuncao endotelial com comprometimento no relaxamento a ACh (CT Rmax: 76.7±5.4 e pD2: 7.9±0.3 vs. apoE-/- Rmax: 62.7±5.5 e pD2: 6.7±0.2) e maior resposta a FEN (CT Rmax: 51.1±9.2 e pD2: 6.8±0.06 vs. apoE-/ Rmax: 82.0±8.3 e pD2: 6.8±0.07). Atraves de metodo indireto, a producao basal de NO encontrou-se diminuida nesses animais (demostrada pela diminuicao no delta de contracao apos bloqueio com L-NAME (CT 0.46±0.04 e 45.3±4.1% vs. apoE 0.30±0.01 e 33.2±1.9%). O mesmo foi observado atraves do metodo direto utilizando DAF-2DA: os animais apoE-/- apresentaram diminuicao na producao de NO (CT 131855±15774 vs. apoE-/- 84057±13397). A producao de NO diminuida nos animais apoE-/- foi revertida apos tratamento agudo com NDBP, demonstrada por aumento na concentracao de NO medida por DAF-2DA em ambos os grupos (CT 196357±18312 vs. apoE-/- 223507±6996). Atraves da utilizacao da sonda DHE observou-se que os animais apoE-/- apresentaram aumento na producao de EROs (CT 114036±15280 vs. apoE-/- 166649±13022). O NDBP promoveu relaxamento vascular na mesma proporcao em ambos os grupos na ausencia de endotelio (apoE-/- Rmax: 93±4.1 e pD2: 5.8±0.3; CT Rmax: 102±9.6 e pD2: 5.6±0.4), porem na presenca de endotelio os animais apoE-/- demonstraram maior sensibilidade ao composto (Rmax: 76±11,3 e pD2: 7,2±0,4) quando comparados ao controle (Rmax: 69±6,7; pD2: 7,3±0,4). O tratamento agudo com NDBP reverteu o prejuizo ao relaxamento a ACh observado nos animais apoE-/- (79,4±3,9; pD2: 8,2±0,4) quando comparado ao controle (Rmax: 76,0±3.7; pD2: 7,9±0,2). A melhora da funcao vascular induzida pelo NDBP foi abolida apos incubacao conjunta com HDX (Rmax: 59,9±7,1 e pD2: 6,6±0,3). O relaxamento induzido pelo NDBP em vasos de animais apoE-/- sem endotelio (Rmax: 93±4,1; pD2:5,8±0,3) foi abolido apos pre-incubacao com HDX (Rmax: 0,5±0,6; pD2: 6,8±0,9). No intuito de avaliar se o NDBP possui atividade antioxidante, o tempol (mimetico da SOD) foi pre-incubado com ou sem NDBP. O tempol pre-incubado com NDBP nao tem seu efeito potencializado (Rmax: 65,1±7,3) quando comparado ao tempol sem NDBP (Rmax: 67,4±9,5). Os animais apoE-/- tratados cronicamente com NDBP (40mg/kg/in), apresentaram reversao no quadro de disfuncao endotelial, demonstrado por melhora na resposta de relaxamento a ACh quando comparado aos animais apoE-/- nao tratados (Rmax: 87,4±3,1; pD2: 7,8±0,1 vs. Rmax: 62,7±5,5; pD2: 6,7±0,2 respectivamente), equiparando aos animais controle (Rmax:76,7±5,4; pD2: 7,9±0,3). Tambem apresentaram aumento na producao basal de NO demonstrado pelo aumento no delta de contracao quando comparado ao apoE-/- nao tratado (∆: 0,39±0,2 vs. ∆: 0,30±0,01 respectivamente). Desta maneira, e possivel concluir que o NDBP apresenta efeitos beneficos na aterosclerose experimental, sendo capaz de reverter o quadro de disfuncao endotelial atraves do aumento da biodisponibilidade de NO e de seu efeito antioxidante.
MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1859718 - CAMILLE DE MOURA BALARINI
Interno - 1971886 - MARIA DO SOCORRO DE FRANCA FALCAO
Externo ao Programa - 091.005.947-09 - PATRICK WANDER ENDLICH - UFES