Banca de DEFESA: DAVI AZEVEDO FERREIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: DAVI AZEVEDO FERREIRA
DATA: 28/08/2024
HORA: 14:00
LOCAL: SALA 02 - IPEFARM
TÍTULO: Perfil imunomodulador do γ-benzilideno digoxina 8 (BD-8) em macrófagos peritoneais murinos
PALAVRAS-CHAVES: Imunomodulação. Inflamação. Zymosan. Fagocitose. Mecanismos de sinalização.
PÁGINAS: 74
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Farmácia
RESUMO: Os Esteroides Cardiotônicos (ECTs), são compostos naturais que apresentam várias atividades biológicas e que possuem a capacidade de interagir e gerar inibição na Na+/K+-ATPase. A secreção de algum desses esteroides (marinobufagina e ouabaína) é estimulada pelo aumento da concentração plasmática de sódio, angiotensina II e hormônio adrenocorticotrófico (ACTH). Baixas concentrações de ouabaína, não inibem a bomba, mas promovem alterações conformacionais na Na+/K+-ATPase. Os ECTs apresentam a capacidade de gerar modulações na atividade do sistema imunológico, atuando no processo inflamatório, modulando moléculas como a Proteínas Kinases Ativadas por Mitógenos (MAPK) p38, CD18 e do Fator Nuclear kappa-B (NF-κB). O BD-8, é um novo ECT sintético derivado da digoxina. No entanto não se conhece o efeito biológico desse novo composto. Com isso, o presente estudo objetivou investigar a atividade imunomoduladora do BD-8 in vitro e desvendar os possíveis mecanismos envolvidos nessa atividade. Para isso, camundongos Swiss fêmeas foram previamente estimulados com uma injeção intraperitoneal (i.p.) de tioglicolato para a realização da cultura de macrófagos peritoneais. As células foram estimuladas com zymosan (ZYM) (0,2 mg/mL) e/ou tratadas com diferentes concentrações do BD-8 (1nM, 10nM, 100nM, 1μM, 10μM, 100μM). As células foram submetidas a um ensaio de MTT (Brometo de 3-metil-[4-5dimetiltiazol-2-il] -2,5 difeniltetrazólio), para determinação da citotoxicidade, além de serem submetidas a ensaio de dosagem de óxido nítrico (NO), pelo ensaio usando solução de Griess. A dosagem de citocinas (IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10) foi feita pelo ensaio de ensaio imunoenzimático (ELISA) do tipo sanduíche. A capacidade fagocítica foi feita por dois ensaios, ambos em placa de 24 poços (5x106 células/poço) e analisada a quantidade de ZYM fagocitado, sendo considerado com atividade fagocítica quando apresentava mais de três partículas de ZYM fagocitadas; e o ensaio com partículas fluorescentes de RedZYM e posteriormente analisada as partículas fagocitadas por citômetro de fluxo. A sinalização celular, as células foram fixadas, permeabilizadas e marcadas com anti-Akt, anti-mTOR, anti-iNOS, anti-p-p38, anti-p-ERK1/2, anti-p-NF-κB, anti-p-Src e anti-COX-2, as células foram ajustadas a 1x106 células/tubo de citômetro, e feita a leitura de 10.000 eventos em citômetro de fluxo. Como resultado, foi visto que o BD-8 apresentou atividade citotóxica na maior concentração testada (100μM), sendo então excluída dos experimentos subsequentes. A produção de NO foi modulada negativamente pelo BD-8 nas concentrações de 1μM (19,40%) e 10μM (32,08%). O tratamento com o BD-8, na concentração de 10μM, foi capaz de reduzir em 17% o nível da citocina IL-1β, já na concentração de 100nM foi capaz de aumentar em 39% o nível da IL-10. A capacidade fagocítica do ZYM em macrófagos foi diminuída no grupo tratado na concentração de 10μM (13,5%), bem como, na mesma concentração, reduziu a atividade fagocítica (36%) de partículas de RedZYM. O BD-8 foi capaz de modular negativamente as vias: da iNOS, Akt/mTOR, p38/ERK, translocação de NF-κB e Src, porém não modulou as EROs e COX-2. Dessa forma, este trabalho contribui para um melhor entendimento do efeito biológico da BD-8 e do papel imunológico desse esteroide cardiotônico.
MEMBROS DA BANCA:
Interno - 1117945 - MARCIA REGINA PIUVEZAM
Externo ao Programa - 1092870 - NAIARA NAIANA DEJANI
Presidente - 1340309 - SANDRA RODRIGUES MASCARENHAS