Banca de DEFESA: ANTONILENI FREIRE DUARTE MEDEIROS

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ANTONILENI FREIRE DUARTE MEDEIROS
DATA: 29/08/2013
HORA: 14:00
LOCAL: PgPNSB
TÍTULO: Uso de cromatografia a líquido de alta eficiência preparativa para isolamento de alcaloides de Cissampelos sympodialis Eichl. e estudo de farmacocinética preliminar de warifteína
PALAVRAS-CHAVES: CLAE-PREP. Espectrometria de massas. Cissampelos sympodialis. Warifteína. Cinética.
PÁGINAS: 151
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Farmácia
RESUMO:

O uso da cromatografia a líquido de alta eficiência preparativa (CLAE-PREP) no isolamento de produtos naturais, mostra-se como uma técnica robusta, versátil e rápida, que garante a purificação e o isolamento de substâncias de matrizes complexas, como os produtos naturais. Essa técnica é uma ferramenta valiosa numa área em que a purificação e obtenção de amostras em quantidade é algo laborioso, e muitas vezes, há necessidade de reisolamento de amostras; assim, sua reprodutibilidade é uma grande vantagem. A combinação da CLAE com a espectrometria de massas permite unir as vantagens da cromatografia, como a alta seletividade e eficiência de separação, às vantagens da espectrometria de massas, como a obtenção de informação estrutural, massa molar e aumento adicional de seletividade. Cissampelos sympodialis Eichl. é uma espécie da flora brasileira, encontrada desde o Ceará até o norte de Minas Gerais, ocorrendo principalmente em áreas de semi-árido. A infusão das raízes da planta é popularmente utilizada no nordeste do Brasil para tratamento de asma, bronquite e reumatismo, dentre outras enfermidades inflamatórias. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método rápido e reprodutível para o isolamento dos marcadores químicos estabelecidos e de outros alcaloides de C. sympodialis Eichl., e utilizar o padrão de warifteína para quantificação da mesma em fluidos biológicos com vistas à determinação de parâmetros farmacocinéticos do alcaloide após administração in vivo em ratos. Após a obtenção da fração de alcaloides terciários totais das raízes (FATT-rz) de C. sympodialis Eichl. a mesma foi injetada em CLAE-PREP com detecção por ultravioleta utilizando uma coluna preparativa de fase reversa Luna C18, (25 x 21,2cm, 5μm, Phenomenex). A identificação estrutural dos alcaloides foi realizada por espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C, espectrometria de massas e espectrometria de infravermelho. O método cromatográfico utilizado consistiu em gradiente de 0-15 min (75 %), 15-20 min (80 %), 20-25 min (100 %), [Símbolo] de 278 nm, fluxo de 5,0 mL/min e tempo de corrida de 20 min, com fase móvel de metanol e água, ambos basificados com amônia para pH 8,0 e a massa de FATT-rz injetada por cada corrida cromatográfica na coluna foi 800 mg. Foram isolados os alcaloides warifteína (pureza 99,79%), metil-warifteína (pureza 98,52%), os epímeros de desmetil-roraimina, além de um alcaloide inédito na literatura que teve sua estrutura elucidada e foi denominado de Sousina. Animais da espécie Ratus wistar receberam dose única de 1,0 mg/Kg de warifteína intravenosa e as coletas de sangue foram realizadas nos tempos 5, 15, 30, 60, 120 e 180 min. As amostras sangue foram centrifugadas para obtenção do plasma e extraídas por precipitação de proteínas utilizando acetonitrila. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados com base nas curvas de concentração plasmática versus tempo pelo modelo não-compartimental. A faixa de linearidade para o método cromatográfico foi entre 10 e 500 ng/mL e os parâmetros cinéticos foram Cmáx 16,08 μg/mL, Tmáx 12,5 min-1, Kel 0,01355 min-1. O método proposto por CLAE-EM/EM permitiu quantificar a warifteína em fluido plasmático de rato com a extração das amostras por precipitação de proteínas, ainda, houve grande variabilidade interindividual entre os animais usados no experimento cinético. O método de isolamento por CLAE-PREP é uma alternativa prática, rápida e robusta para obtenção dos alcaloides de C. sympodialis.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 1349965 - BARBARA VIVIANA DE OLIVEIRA SANTOS
Presidente - 2113418 - EDUARDO DE JESUS OLIVEIRA
Externo ao Programa - 2526001 - FABIO SANTOS DE SOUZA
Interno - 540.260.329-49 - LUIS CEZAR RODRIGUES - UFPB
Externo à Instituição - TULIO FLAVIO ACCIOLY DE LIMA E MOURA - UFRN